蛋白A琼脂糖凝胶FF

蛋白A-琼脂糖凝胶FF

（Protein A Berpharose FF）

1.产品介绍

          重组蛋白A琼脂糖凝胶FF（Protein A Berpharose FF）亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组蛋白A（rProtein A）为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。蛋白A（Protein A）能特异性地与抗体IgG分子的Fc区结合，所以Protein A亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。

2.规格

1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、25ml、100ml、500ml、1L

3.产品性能 

性能

指标

基质

4%琼脂糖微球

配基

重组蛋白A

配基密度

>6mg/ml

载量

≥35mg人IgG /ml

粒径

45-165μm

耐压

0.3Mpa

流速

50-300 cm/h

pH稳定范围-工作/清洗

3~9/3~10

储存缓冲液

20%乙醇

储存温度

4-8℃

4. IgG与蛋白AG结合强度比较

种类

亚类

蛋白A

蛋白G

蛋白A蛋白G融合蛋白

人

IgG1

+++

IgG2

IgG3

+

IgG4

IgM

-

IgD

IgA

Fab

兔

IgG

++

山羊

牛

小鼠

IgG2a

IgG2b

大鼠

IgG2c

猪

犬

鸡

IgY

马

IgG（ab）

IgG（c）

5.纯化流程

应用举例：

结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.0

洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，PH3.0或0.1M柠檬酸缓冲液，pH 4.0

中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

1) 1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5-10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液。

2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡5-10个柱床体积。

3)将5 ml人多抗血清用结合缓冲液稀释到50ml，0.45μm滤膜过滤上样。

4)用结合缓冲液再洗5-10个柱床体积。

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性。

6)每次使用后依次使用3个柱体积的结合缓冲液，5个柱体积的去离子水， 5 个柱体积的 20%的乙醇平衡保存，防止填料被细菌污染。

7) SDS-PAGE电泳分析。

6.注意事项：

1)样品洗脱后一般pH很低，应立刻用碱性中和缓冲液（如1MTris-HCl，pH8.5）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5-10%、pH7.5的缓冲液（如1MTris-HCl或1M磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。

2)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

3)填料再生清洗：随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，严重影响纯化效果，这时需要对填料进行再生清洗（如下步骤）

去除沉淀或变性物质：用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

去除疏水性吸附造成的非特异性吸附物质：用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton™ X-100 清洗，然后然后立即用 5倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗

4)本产品保存条件：20%乙醇，4~8℃。